胸腺五肽

基本信息

中文名称：胸腺五肽

中文别名：胸腺生成素;刹莫潘汀;

英文名称：Thymopentin

英文别名：Timunox;Arg-Lys-Asp-Val-Tyr;HArgLysAspValTyrOH;RKDVY;THYMOPENTIN 5;TP-5;Sintomodulina;thymopoietin;Immunox;THYMOPETIN;thymopoietin fragment 32-36;

CAS号：69558-55-0

分子式：C30H49N9O9

分子量：679.76500

结构式：

精确质量：679.36500

PSA：325.17000

LogP：1.96390

物化性质

密度：1.44 g/cm3

折射率：1.635

储存条件：-20ºC

TP-5的制备方法主要有液相合成法和固相合成法两种。

TP-5的液相合成

(1)采用Boc(叔丁氧羰基)和Fmoc(9 -芴甲氧羰基)策略相结合的液相方法合成TP-5:保护氨基酸原料分别为:HCl·H-Tyr(Bzl)-OBzl、Boc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH和Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 缩合试剂为BOP-HOBt, 缩合时间2 h, 反应溶剂为三氯甲烷, 碱中和试剂采用N-甲基吗啉(NMM)。最后保护基的脱除系统采用三氟甲磺酸/三氟醋酸(TFMSA/TFA)+苯甲硫醚, 0 ℃反应2 h。

(2)采用Boc氨基保护策略和碳链逐步增长法液相合成TP-5：氨基采用Boc-HCl/二噁烷保护系统, DCC-HOBt缩合得到全保护的Boc-Arg(Tos)-Lys(Z)-Asp(OBz1)-Val-Tyr(Bz1)-OMe, 皂化后, 采用TFA/TFMSA+苯甲醚、茴香硫醚和邻甲基苯酚, 室温反应1h, 脱除侧链得白色结晶, 纯化后总收率30%。

(3)采用液相最小保护策略逐步合成TP-5：氨基酸保护策略为:HC1· Tyr-OMe、Boc-Val-OH、Boc-Asp(OBz1)-OH、Boc-Lys(2C1Z)-OH、Z-Arg-OH, DCC-HOBt缩合形成二肽、三肽和四肽, HBTU缩合形成保护五肽, 最后采用Pd/C氢解脱除侧链保护得到目的产物。在不发生较大副反应的前提下, 侧链功能基尽量不采取保护, 可以避免HF的强酸裂解, 条件比较温和, 更适合于产业化。

TP-5的固相合成

固相法主要有Boc/Bzl和Fmoc/OtBu两种合成保护策略。

(1)Boc固相合成法:Boc合成法的主要策略是采用TFA可脱除的Boc为α-氨基保护基, 侧链保护采用苄醇类。合成时将一个Boc-氨基酸衍生物共价交联到Merrifield或MBHA树脂上, 用TFA脱除Boc,用三乙胺中和游离的氨基末端, 然后通过DCC活化、偶联下一个氨基酸, 最终脱保护多采用HF法或TFMSA法。

(2)Fmoc固相合成法:Fmoc法与Boc法的根本区别在于采用了碱可脱除的Fmoc为α-氨基的保护基, 侧链的保护采用TFA可脱除的叔丁氧基等,树脂采用90%TFA可切除的对烷氧苄醇型树脂和1%TFA可切除的二烷氧苄醇型树脂, 最终的脱保护避免了强酸处理。Fmoc作为氨基保护基的优点在于其对酸稳定, 用TFA等试剂处理不受影响, 仅需用温和的碱处理, 通过β 2消除反应即可脱去, 不需用三级胺中和, 且Fmoc基团有特征性紫外吸收, 易于检测反应的进行, 给自动化合成带来方便。但Fmoc保护的氨基酸价格昂贵, 合成成本也相应较高。在TP-5的Fmoc固相合成中, 采用Wang树脂,DMF为溶剂, DIC-HOBt缩合, 侧链保护策略为:Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Val-OH和Fmoc-Tyr(tBu)-OH。

胸腺生成素-II的制备

原料处理、浓缩 以小牛胸腺为原料，加入0.1mol/L NH4HCO3，搅匀提取，得碱性蛋白液，加热至70℃除去变性杂蛋白，去除沉淀，将上清液浓缩。

小牛胸腺[0.1 mol/L NH4HCO3]→碱性蛋白液[70℃, 去杂蛋白]→[浓缩]浓缩液

浓缩液[Sephadex G-50]→[羟基磷石灰柱]层析液[QAE-Sephadex 柱]→胸腺生成素-II

胸腺生成素-II的提取

原料处理、超过滤、离心 以新鲜牛脾为原料，加入0.1 mol/L NH4HCO3，匀浆提取，得碱性可溶性蛋白。用H10×100超过滤，将滤液浓缩，水浴加热至70℃，离心15 min，留上清液。

新鲜牛脾[0.1 mol/L NH4HCO3]→碱性蛋白液[超过滤，浓缩]→[70℃，离心15min]上清液

过柱纯化 取上清液调节pH为5.2，加入阳离子交换树脂(50 mg/ml)，搅拌，过滤，再将滤液调节pH为9.5，加入阳离子交换树脂(50mg/m1)，搅拌，过滤，得滤液。

上清液[pH5.2, 阳离子柱]→滤液[pH9.5, 阳离子柱]→滤液

凝胶滤过、纯化 滤液经Sephadex G-75凝胶过滤，得活性TP和泛激素，再经阴离子交换树脂层析(NH4HCO3, 离子强度变化0.1-0.8mol/L)，得 TP-III、杂蛋白和泛激素。

滤液[Sephadex G-75凝胶过滤]→活性TP和泛激素[阴离子树脂层析]→得TP-III、杂蛋白和泛激素。

一般用作胸腺五肽注射液，主治：可用于恶性肿瘤病人经放化疗后，免疫功能损伤者。

主要活性成分

N-[N-[N-[NαL-精氨酰-L-赖氨酰[-L-α-天门冬氨酰]-L-缬氨酰]，L-酪氨酸。按干燥品计算，含C30H49N9O9不得少于95.0%。

性状

白色冻干粉末。

在水中极易溶，在乙醇中微溶、在乙酸乙酯、乙醚或石油醚中不溶。

鉴别

（1）取本品1mg，加水1ml溶解后，吸取20μl点于滤纸上，凉干，喷以0.1%茚三酮溶液（取0.1g茚三酮，加无水乙醇90ml和正丁醇10ml溶解），置105℃中干燥5分钟，应显蓝紫色斑点。

（2）取本品1mg，加水1ml溶解后，加碱性酒石酸铜试液2滴，即显蓝紫色。

（3）取本品，加水制成每1ml中含50μg的溶液，照分光光度法（中国药典1995年版二部附录ⅣA），在275nm波长处有最大吸收。

检查

溶液的澄清度与颜色 取本品5mg，加水5ml溶解后，溶液应澄清无色。

其他肽 取本品，加水制成1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（中国药典1995年版二部附录ⅤB页）试验，吸取上述两种溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-水-冰乙酸（4∶1∶5）为展开剂，展开后，晾干，喷以茚三酮溶液（取茚三酮0.1g，加无水乙醇90ml和正丁醇10ml使溶解），在105℃干燥5分钟，检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于1个，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深（5.0%）。

干燥失重 取本品，以五氧化二磷为干燥剂，减压干燥至恒重，减失重量不得过5.0%（中国药典1995年版二部附录ⅧL）。

热原取本品，加灭菌注射用水制成每1ml中含60μg的溶液，依法检查（中国药典1995年版二部附录ⅪD），剂量按家兔体重每1kg注射1ml，应符合规定。

含量测定

照高效液相色谱法（中国药典1995年版二部附录ⅤD）测定。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅键合硅胶为填充剂，pH7.0磷酸盐缓冲液-甲醇（60∶40）为流动相；检测波长为275nm。理论板数按胸腺五肽峰计算应不低于1200。取对照品溶液20μl，重复注样5次，其峰面积的变异系数应不大于1.5%。

对照品溶液的制备 取胸腺五肽对照品适量，精密称定，加pH7.0磷酸盐缓冲液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

测定法 取本品适量，精密称定；加pH7.0的磷酸盐缓冲液溶解并定量稀释制成每1ml中约含胸腺五肽0.5mg的溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取胸腺五肽对照品溶液适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

作用与用途

改善恶性肿瘤病人因放化疗而致免疫功能低下。

用法与用量

临用前，加灭菌注射用水适量使溶解。每天一次，每次1mg，疗程30天，肌肉注射，与放化疗药物同时使用。

TP是从小牛胸腺提取的一种多肽，发现两种相似的类型：胸腺生成素-I (TP-I)和胸腺生成素-II(TP-II)。TP-II为49肽，由13种氨基酸组成。TP-I和TP-II的结构差异是TP-II肽链上丝1和苏43改变为TP-I的甘1和组43。精32-酪36的五肽在体内外均显示出TP-II的T细胞分化活性。49个氨基酸中5个有生理活性，现已人工合成精 赖天胺缬酪5肽，即胸腺喷丁(timopentin)，并用于临床。

另外，从牛脾中分离的脾脏素(splenin)与TP-II相似，所以称为TP-III。人工合成的TP-II的5肽暂称为胸腺合成素(TPe)，合成的TP-III的5肽暂称为脾脏合成素(SPe)。TP-II和TPe作用于神经肌肉传递，诱导T细胞前体细胞的体外分化，同时抑制B细胞的分化。TP-III和SPe则可诱导T、B细胞前体细胞的分化。泛激素(Ubiquitin)由74个氨基酸残基组成，可诱导T细胞、B细胞分化，广泛存在于动物组织(含胸腺)和植物、菌类细胞中，与免疫功能有关。

胸腺五肽的作用之一是诱导T细胞分化。它可选择性地诱导Thy-1-的前胸腺细胞转化为Thy-1+的T细胞。其T细胞分化作用由胞内cAMP水平升高介导。胸腺五肽的另一基本作用是对成熟外周血T细胞的特异受体结合，使胞内cAMP水平上升，从而诱发一系列胞内反应，这也是它免疫调节功能的基础。在正常机体状态下胸腺五肽显现免疫刺激作用，能显著增高脾淋巴细胞的E玫瑰花结形成率及转化率，对免疫应答的初次或再次反应的不同阶段都有增强作用，能增多IgM类型和IgG或IgA类型的抗体形成细胞。胸腺五肽还可增强巨噬细胞的吞噬功能，增加多形核嗜中性白细胞的酶和吞噬功能，升高循环抗体含量，增强红细胞免疫功能。胸腺五肽能活化CD4和CD8阳性细胞，使专一的Tc细胞寿命维持更长时间，同时也可活化Th细胞，诱导Ts细胞的功能。胸腺五肽的抗感染力和治疗作用与它增进TC细胞活性相关。在抗感染免疫中适量胸腺五肽可明显增加干扰素的产生。诱导和促进T细胞分化成熟；调节T淋巴细胞亚群比例使CD4/CD8趋于正常 ；增强巨噬细胞吞噬功能 ；增强红细胞免疫功能 ；提高自然杀伤细胞的活力 ；提高白介素-2的产生水平与受体表达水平；增强外周血单核细胞γ干扰素的产生 ；增强血清中SOD活性。

可用于恶性肿瘤病人经放化疗后，免疫功能损伤者 ；乙型肝炎的治疗 ；重大外科手术及严重感染 ；自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎，红斑狼疮；Ⅱ型糖尿病、更年期综合征；年老体衰免疫功能低下者。

（1）用于18岁以上的慢性乙型肝炎患者。

（2）各种原发性或继发性T细胞缺陷病（如儿童先天性免疫缺陷病）。

（3）某些自身免疫性疾病（如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮)。

（4）各种细胞免疫功能低下的疾病。

（5）肿瘤的辅助治疗。

1. 皮下注射

(1)原发性免疫缺陷：开始时一日0.5～1mg/kg，连续2周；维持量为一次0.5～1mg/kg，一周2～3次。

(2)继发性免疫缺陷：一次50mg，每周3次，连续3～6周。

2. 肌肉注射

(1)原发性免疫缺陷：开始时一日0.5～1mg/kg，连续2周；维持量为一次0.5～1mg/kg，一周2～3次。

(2)改善恶性肿瘤患者的免疫功能低下：与放疗、化疗同时使用，一日1次，一次1mg/kg，28日为一疗程。

1. 对本品有过敏反应者或器官移植者禁用。

2. 已使用免疫抑制治疗的患者(如器官移植者)禁用。

(1)耐受良好，个别可见恶心、发热、头晕、胸闷、无力等不良反应，少数患者偶有嗜睡感。

(2)慢性乙型肝炎患者使用时可能ALT水平短暂上升，如无肝衰竭预兆出现，仍可继续使用本品。

1. 本品通过增强患者的免疫功能而发挥治疗作用，故对正在接受免疫抑制治疗的患者(例如器官移植受者)不应使用本品，除非治疗带来的裨益明显大于危险性。

2. 治疗期间应定期检查肝功能。

3. 目前尚不知道本药是否对胚胎有伤害，或是否影响生育能力。故本药只能在十分必要时才给孕妇使用。目前尽管未证实本品经人乳排出，但用于哺乳期妇女仍应特别慎重。

4. 在18岁以下患者，本药的安全性和有效性尚未确立。

5. 目前尚无任何关于人体过量(治疗或意外)的报道。动物毒性实验显示在10mg/kg剂量以下(目前研究所用最大量)没有任何副反应发生。

孕妇及哺乳期妇女用药

动物生育研究显示，在对照组及本药治疗组，其胚胎异常影响无任何差异。目前尚不知道本药是否对胚胎有伤害，或是否影响生育能力。故本药只能在十分必要时才给予孕妇使用。目前尽管未证实本品经人乳排出，但用于哺乳期应特别慎重。

1.本品与许多常用药物合并使用，其中包括干扰素、消炎药、抗生素、激素、镇痛药、降压药、利尿药、治疗心血管疾病的药物、中枢神经系统药物、避孕药，没有任何干扰现象出现。

2.本品与干扰素合用，对于改善免疫机能有协同作用。